Дальнейшая разработка и совершенствование метода гипофизарных инъекций шли по следующим направлениям:

1. Разработка методики сбора сырья (гипофизов), изготовления и стандартизации препаратов для гормональной стимуляции нереста рыб;

2. Выявление таксономической специфичности действия гипофизов разных видов;

3. Определение доз и оптимальных схем введения препаратов в организм рыбы.

Разработки по первому направлению показали, что для сбора гипофизов наиболее пригодны половозрелые особи рыб незадолго до сезона нереста. В это время в гипофизах накапливается максимальное количество гонадотропных гормонов. Консервация извлеченных гипофизов возможна путем обезвоживания, обезжиривания и последующего высушивания. В России и Китае для обезвоживания и обезжиривания гипофизов применяется ацетон, в США - спирт. Для стандартизации гипофизарных препаратов используется оценка их активности на тест-объектах. Наибольшее распространение в качестве тест-объекта получили самцы озерной лягушки (Боев, 1989). Гонадотропная активность гипофизарных препаратов, определенная на данном тест-объекте, выражается в лягушачьих единицах (л. е.). Наиболее часто гипофизарные препараты поступают на рынок и реализуются в виде крупки, представляющей собой целые гипофизы после их выдержки в ацетоне и последующего высушивания. В некоторых случаях реализуется порошок из растертых сухих желез или глицериновая вытяжка.

Исследования по второму направлению показали, что гипофизы одних видов рыб могут действовать, а могут и не действовать на представителей других видов. Не вдаваясь в подробное обсуждение этого вопроса, укажем, что для стимуляции нереста наиболее эффективно использование гипофизов рыб того же вида или близкородственных видов того же семейства. Для осетрообразных (веслоноса, стерляди, белуги, калуги, шипа, севрюги и осетров сибирского, русского, амурского и др.) предпочтительно использовать гипофизы рыб семейства осетровых, однако они довольно хорошо реагируют и на гипофизы карповых рыб: сазана (карпа) и леща (Подушка, 1999). Гипофизы окуневых можно использовать только для рыб этого семейства. В то же время, судака и окуня можно разводить с использованием гипофизов карповых рыб (Баранникова, 1969). Считается, что наиболее универсальными являются гипофизы сазана (карпа) и леща. Их можно использовать при воспроизводстве широкого спектра видов рыб из семейств осетровых, карповых и окуневых. На некоторых видах рыб с успехом были апробированы гипофизы кур (Fagberno et al., 1992; Amaral et al., 1995).

Оптимальные дозировки гипофизарных препаратов и схемы инъецирования различны для разных видов. Наиболее часто применяются разовая и градуальная инъекции. В первом случае вся необходимая доза препарата инъецируется единовременно, во втором - вначале делается предварительная инъекция, при которой в организм рыбы вводится небольшая часть от общей дозы препарата, а затем - разрешающая инъекция, при которой инъецируется оставшаяся часть дозы.

В настоящее время гипофизарные препараты широко используются в аквакультуре России: в осетроводстве, причем в последние годы не только при разведении, но и при получении пищевой икры; в карповодстве; при воспроизводстве растительноядных рыб (белого и пестрого толстолобиков, белого амура) и черного амура; в сомоводстве и в аквариумистике. Более ограниченное применение они находят при разведении кефалеобразных, камбалообразных, лососеобразных, окунеобразных и др. видов.

Несмотря на то, что в последние годы в рыбоводстве для стимуляции созревания половых продуктов у производителей стали применять не только гипофизарные препараты, но и гонадотропин-рилизинг гормоны и их аналоги (Гончаров и др., 1991; Тренклер и др., 2008), гипофизарные инъекции себя далеко еще не изжили. Об этом, в частности, свидетельствует резко возросший в последние годы спрос на рыбные гипофизы среди рыбоводов

Нерестином заменить гипофиз на растительноядных 2 сезона пробовал - затея провалилась, не пошел.

Название видов рыб Доза
Осетровые 0,07 мл/л воды (экспозиция 5-7 минут)
Сом 0,04 мл/л воды (экспозиция 2-5 минут)
Карповые (карп, сазан, белый амур, толстолобик, линь) 0,04 мл/л воды (экспозиция 2-3 минуты)

Пример расчета: на 50 литров воды при дозе анестетика = 0,04 мл/л необходимо взять 2 мл анестетика (0,04 мл х 50 л = 2 мл)
Процедура приготовления рабочего раствора: влить анестетик в бутыль на 1,5 л. на 1/5 наполненный водой. Тщательно встряхнуть содержимое и вылить в ванну, где будет находиться рыба для усыпления. После взятия половых продуктов у производителей их сразу размещают в емкости с проточной водой.
Гвоздичное масло дешевое, продается в любой аптеке и безопасное для человека и рыб.

На осетрах

В настоящее время в практике аквариумного рыбоводства используется значительный арсенал различных препаратов и веществ, влияющих на обмен веществ рыб, среди которых особого внимания заслуживают гормональные препараты, стимулирующие процессы созревания половых продуктов и активизирующие нерест рыб; анестезирующие вещества, применяемые при пересадках, перевозках и манипуляциях с инъекциями различных веществ в тело рыб; вещества для обесклеивания икры рыб, стимулирующие рост молоди и выживаемость икры и личинок рыб; мутагенные вещества, используемые в генетике и селекции рыб; бактерицидные вещества для обработки воды в нерестовиках; вещества, вызывающие реверсию пола.
Гормональные препараты. Для стимуляции созревания половых продуктов рыб наиболее часто используют такие препараты, как суспензия гонадотропных гормонов гипофиза; хориогонин, нерестины, выпускаемые научно-производственным объединением «Аквакультура» (г. Пущино).

Вскрытие на рабочем столике рыбы при заготовке гипофиза

Расположение гипофиза в черепе рыбы
Наиболее подходящими (в силу видоспецифичности действия гонадотропных гормонов) являются препараты собственных гипофизов вида. Однако получение значительного количества собственных гипофизов проблемных рыб — маловероятно. Наиболее универсальным действием обладают гипофизы карпа, леща, карася, вьюна.

Для заготовки гипофизов используют живую, половозрелую рыбу (в крайнем случае, свежеснулую или замороженную). Нельзя получать гипофизы от неполовозрелых, больных, старых или только что отнерестившихся рыб. У таких рыб гонадотропные гормоны в гипофизе отсутствуют. Максимальное содержание их наблюдается перед нерестом. Карповые гипофизы лучше заготавливать в осенне-зимний период.

Для получения половых продуктов от окунеобразных рыб можно использовать не только гипофизы карпа, но и судака.

Гипофиз представляет собой небольшой белый шарик, расположенный под средней частью промежуточного мозга рыбы. Для извлечения его из черепа рыбы используют деревянный столик, вдоль средней линии которого делают длинную сквозную щель для свободного прохода лезвия ножа.

Поперек этой щели с внутренней стороны посередине стола прикрепляют деревянную планку, предназначенную для упора конца ножа при вскрытии черепа рыбы.

Точки введения гипофиза рыбе
Для обескровливания рыбе перерезают жабры, затем острым ножом, положив рыбу набок, прокалывают затылочные кости и, пропустив нож сквозь щель стола и уперевшись концом ножа в деревянную планку, нажимают на него, срезая кости черепа. Мозг сверху и с боков аккуратно промокают углом фильтровальной бумаги, подрезают нервы вокруг мозга, перерезают сзади мозг на границе продолговатого и спинного мозга и, ухватившись пинцетом за конец продолговатого мозга, вынимают головной мозг из черепной коробки. Гипофиз будет находиться в нижней части мозга или, что чаще бывает, отрываясь, будет располагаться под пленкой на дне черепной коробки, откуда его извлекают, предварительно промокнув жидкость в черепной коробке ватным тампоном или фильтровальной бумагой.

Гипофизы собирают в баночку с небольшим количеством чистого ацетона и выдерживают около часа (они должны быть полностью погруженными в ацетон), затем перемещают во вторую баночку с ацетоном (с чистым ацетоном без воды!), где ацетона должно быть по объему в 10—15 раз больше, чем гипофизов, и выдерживают 12 ч. Этот ацетон сливают, заливают такой же объем свежего ацетона и выдерживают еще 6—8 ч. Далее гипофизы раскладывают на фильтровальную бумагу в сухом помещении и подсушивают при комнатной температуре до исчезновения запаха ацетона. Недопустимо подогревание гипофизов или попадание на них прямых лучей солнечного света.

Добавлено (08.10.2009, 09:20)
---------------------------------------------
Хранят гипофизы обычно до двух лет в сухих пузырьках с ваткой, герметично закрытых. Пузырек не следует открывать в помещении с повышенной влажностью.

Для гипофизарных инъекций пригодны сохранившие свою форму гипофизы белого или светло-коричневого цвета; заплесневевшие, почерневшие и подмоченные — для работы не годятся.

Гипофизы применяют в виде инъекций их суспензий. Для этого гипофизы взвешивают, растирают в фарфоровой ступке и смешивают с физиологическим раствором, после чего инъецируют рыбам в спинную мышцу чуть ниже спинного плавника. В качестве физиологического раствора для пресноводных рыб используют раствор чистой поваренной соли (6 г/л) или хлориды натрия, калия и кальция (7, 5, 0, 2 и 0, 2 г/л), или бикарбонат натрия (0, 02 г/л), а для морских рыб—хлориды натрия, калия, кальция и магния (7, 8, 0, 18, 0, 166 и 0, 095 г/л), бикарбонат натрия (0, 084 мг/л) или дигидрофосфат натрия (0, 06 г/л).

В инъецировании рыб участвуют два человека: один держит во влажной марле или тряпке предварительно анестезированную рыбу, спиной к напарнику, другой — осуществляет инъекцию, вводя иглу под острым углом под чешуйку в спинную мышцу. Для инъекций используют малоемкие шприцы (0, 5—1 мл) и длинные тонкие иглы (проверить, чтобы не забивались суспензией гипофиза). Перед инъекцией суспензию в ступке перемешивают, несколько раз набирая ее и выпуская в ступку шприцем.

В зависимости от срока хранения гипофиза и вида инъецируемой рыбы вводимая доза составляет от 2 до 20 мг на 1 кг массы самки (около 4 мг на 1 кг). Самцам дают половину дозы самок.

Доза при верхней границе нерестовой температуры может быть на четверть ниже, чем применяемая при низких температурах.

Обычно делают две инъекции: предварительную (от десятой части до половины всей дозы) и разрешающую (оставшуюся часть дозы) с интервалом в 6—15 ч. Самцам вводят только разрешающую дозу, составляющую половину дозы, вводимой самкам.

Для инъецирования мелких рыб используют следующую методику. Гипофиз очень тщательно перетирают в ступке, размешивают в физиологическом растворе и, дав несколько секунд отстояться, набирают в стеклянную трубочку с оттянутым на горелке тонким острым носиком. Носик размечают делениями с объемом в несколько капель.

Чем длиннее и тоньше носик у получившейся таким образом пипетки, тем более точную дозу гипофиза удается ввести рыбе.

На другой конец трубки надевают кусочек шланга, заткнутый с противоположного конца пробкой или зажимом. В эту пипетку набирают объем гипофиза, в 2 раза больший, чем нужно для инъекции, замечают деление и нажатием на резиновый шланг вводят половину объема. Непосредственно перед инъецированием рыбу заворачивают в кусочек мокрого газа и закручивают подобно фантику на конфете со стороны головы и хвоста.

Такую своеобразную упаковку прикалывают к кусочку пенопласта или дощечки за закрученные концы. Инъецируют в упаковке, под кожу, прокалывая через газ покровы спинки рыбы острым концом пипетки.

Всю операцию необходимо производить не мешкая, уверенно и точно, что требует навыка, выработанного определенной практикой. Прикасаться к рыбке руками нельзя, иначе она погибнет. Гонадотропную функцию гипофиза усиливают соли цинка.

Во избежание воспалительного процесса на месте инъекции используют стерильную посуду или добавляют к суспензии гипофиза бициллин-5 или мономицин (1 000 ЕД/мл).

Для получения более раннего созревания половых продуктов некоторые любители используют многократные, мелкими дозами, инъекции гипофиза.

Таким способом у мозамбикской тиляпии удалось вызвать нерест уже на 4-м месяце жизни.

Добавлено (08.10.2009, 09:20)
---------------------------------------------
Хранят гипофизы обычно до двух лет в сухих пузырьках с ваткой, герметично закрытых. Пузырек не следует открывать в помещении с повышенной влажностью.

Для гипофизарных инъекций пригодны сохранившие свою форму гипофизы белого или светло-коричневого цвета; заплесневевшие, почерневшие и подмоченные — для работы не годятся.

Гипофизы применяют в виде инъекций их суспензий. Для этого гипофизы взвешивают, растирают в фарфоровой ступке и смешивают с физиологическим раствором, после чего инъецируют рыбам в спинную мышцу чуть ниже спинного плавника. В качестве физиологического раствора для пресноводных рыб используют раствор чистой поваренной соли (6 г/л) или хлориды натрия, калия и кальция (7, 5, 0, 2 и 0, 2 г/л), или бикарбонат натрия (0, 02 г/л), а для морских рыб—хлориды натрия, калия, кальция и магния (7, 8, 0, 18, 0, 166 и 0, 095 г/л), бикарбонат натрия (0, 084 мг/л) или дигидрофосфат натрия (0, 06 г/л).

В инъецировании рыб участвуют два человека: один держит во влажной марле или тряпке предварительно анестезированную рыбу, спиной к напарнику, другой — осуществляет инъекцию, вводя иглу под острым углом под чешуйку в спинную мышцу. Для инъекций используют малоемкие шприцы (0, 5—1 мл) и длинные тонкие иглы (проверить, чтобы не забивались суспензией гипофиза). Перед инъекцией суспензию в ступке перемешивают, несколько раз набирая ее и выпуская в ступку шприцем.

В зависимости от срока хранения гипофиза и вида инъецируемой рыбы вводимая доза составляет от 2 до 20 мг на 1 кг массы самки (около 4 мг на 1 кг). Самцам дают половину дозы самок.

Доза при верхней границе нерестовой температуры может быть на четверть ниже, чем применяемая при низких температурах.

Обычно делают две инъекции: предварительную (от десятой части до половины всей дозы) и разрешающую (оставшуюся часть дозы) с интервалом в 6—15 ч. Самцам вводят только разрешающую дозу, составляющую половину дозы, вводимой самкам.

Для инъецирования мелких рыб используют следующую методику. Гипофиз очень тщательно перетирают в ступке, размешивают в физиологическом растворе и, дав несколько секунд отстояться, набирают в стеклянную трубочку с оттянутым на горелке тонким острым носиком. Носик размечают делениями с объемом в несколько капель.

Чем длиннее и тоньше носик у получившейся таким образом пипетки, тем более точную дозу гипофиза удается ввести рыбе.

На другой конец трубки надевают кусочек шланга, заткнутый с противоположного конца пробкой или зажимом. В эту пипетку набирают объем гипофиза, в 2 раза больший, чем нужно для инъекции, замечают деление и нажатием на резиновый шланг вводят половину объема. Непосредственно перед инъецированием рыбу заворачивают в кусочек мокрого газа и закручивают подобно фантику на конфете со стороны головы и хвоста.

Такую своеобразную упаковку прикалывают к кусочку пенопласта или дощечки за закрученные концы. Инъецируют в упаковке, под кожу, прокалывая через газ покровы спинки рыбы острым концом пипетки.

Всю операцию необходимо производить не мешкая, уверенно и точно, что требует навыка, выработанного определенной практикой. Прикасаться к рыбке руками нельзя, иначе она погибнет. Гонадотропную функцию гипофиза усиливают соли цинка.

Во избежание воспалительного процесса на месте инъекции используют стерильную посуду или добавляют к суспензии гипофиза бициллин-5 или мономицин (1 000 ЕД/мл).

Для получения более раннего созревания половых продуктов некоторые любители используют многократные, мелкими дозами, инъекции гипофиза.

Таким способом у мозамбикской тиляпии удалось вызвать нерест уже на 4-м месяце жизни.

Добавлено (08.10.2009, 09:21)
---------------------------------------------
В качестве гипофизозаменителя можно использовать хориогонический гонадотропин —хориогонин (синонимы — антелобин, фоллютеин). Это белый или почти белый порошок, растворимый в воде. Растворы нестойкие, поэтому их готовят перед употреблением. Выпускается в герметически закупоренных флаконах по 500, 200 и 100 ЕД в виде порошка, с приложением ампулы в 2 мл с растворителем.

Самкам вводят два раза, самцам — один раз в дозе 1500—2500 ЕД на 1 кг массы рыбы, или 1—3,5 мг на 1 кг рыбы; удобен при инъецировании мелких рыб, так как не забивает носик пипетки.

Используют и ряд других гормонозаменителей гипофиза. К ним относится СЖК (сыворотка жеребой кобылы) — светло-желтая или светло-желтая со слегка розовым оттенком жидкость, иногда опалесцирующая или с небольшим осадком, получаемая от кобыл в начальный период беременности (30—90 дней). Консервируют сыворотку 5%-ным раствором фенола, добавляя на 9 частей сыворотки 1 часть раствора фенола. Сохраняют СЖК в герметически закупоренных банках или во флаконах в темном прохладном месте. Активным началом препарата является глюкопротеид, оказывающий как фолликулостимулирующее, так и лютеинизирующее действие. Для получения половых продуктов препарат вводят один или два раза в дозе около 1 мл, или 1500—3000 ME на 1 кг массы рыбы.

Аналогичное действие имеет на цихлид и вьюновых рыб гравидан (препарат, получаемый из мочи беременных женщин) в дозе 10—50 ME на особь,

У клариасов стимулирующее действие на созревание половых продуктов оказывает ацетат дезоксикортикостерона в дозе 5 мг на 100 г массы рыбы.

Наибольшей результативностью обладают комплексные инъекции гипофиза (12 мл/кг) и хориогонина (500—1000 МЕ/кг), а также смеси гипофиза с пилокарпином (0,001 %-ного раствора 0,5—1 мл/кг), гестофирином (0,5 мг/кг) или нитратом стрихнина (0,5—1 мг) в сочетании с витаминами B1 (2,4 мг), С (5 мг) и 40%-ным раствором глюкозы на 1 кг массы рыбы.

В последнее время для формирования процессов созревания рыб используют новые эндокринные средства, мг/кг при одноразовой обработке: эстрофан (0, 1—0, 5), кломифенцитрат (1—10), прогестерон (1), кортизон (65—225), метапирон (1), эстрадиол (10—245), кортикостерон (53—225), люлиберин или гонадолиберин (0, 5—2).

В настоящее время широкое применение получили нерестины-1—5 производства НПО «Аквакультура», стимулирующие созревание и выделение качественных половых продуктов физиологически подготовленных самок и самцов аквариумных рыб. Нерестины можно вводить внутримышечно, внутриполостно и, что особенно важно при разведении мелких аквариумных рыб, безынъекционным способом — с кормом. В состав нерестинов входят аналоги люлиберина, стимулирующие выработку собственных гонадотропных гормонов непосредственно в гипофизе обработанной рыбы, а также вещества, обладающие антистрессовым и регенеративным действием.

При инъекции хориогонического гонадотропина в дозе 100 ЕД икра оказалась перезрелой и при введении 75 ЕД — недозрелой.

Хорошие результаты получены на двухцветном лабео с двукратной инъекцией: первая — хориогонином, вторая — через сутки суспензией гипофиза (2 мг гипофиза на 100 г массы рыбы).

Нерест произошел в первые сутки после разрешающей инъекции.

Получен прекрасный нерест макрогнатусов через сутки после однократной инъекции хориогонина самкам и самцам в спинную мышцу примерно посредине тела (по 100 ЕД). Единственным условием успеха является то, что гормон надо вводить с возможно меньшим количеством растворителя, желательно не более 0,25 см3.

Успешно разведен таиландский мастацембелус с использованием двукратной инъекции. При предварительном инъецировании самкам вводили в мышцы спины по 200 ЕД хориогонического гонадотропина, самцам — по 50 ЕД.

При разрешающей инъекции доза соответственно 0, 6 и 0, 3 мг гипофиза в 0, 1 мл суспензии. Через 3 ч после разрешающей инъекции для дополнительной стимуляции нереста следует увеличить подачу воздуха в аквариум. Через 3 ч после этого начинаются бурные брачные игры — рыбы буквально свиваются в клубок, после чего начинается икрометание.

Успех при разведении с применением гонадотропных инъекций во многом зависит от того, насколько производители готовы к нересту и насколько удачно подобрана доза инъецируемого гормона. Примером неудачного нереста может служить опыт разведения цихлиды «павлиний глаз». Производителям было введено в мышцу спины: самцу — 400 ИЕ, самке — 200 ИЕ гонадотропного гормона хорио-гонина. Нерест начался через 1, 5 ч. К сожалению, икра после нереста побелела.

Добавлено (08.10.2009, 09:22)
---------------------------------------------
Анестезирующие вещества применяют в двух случаях; для кратковременного обездвиживания рыб на 1—5 мин, с целью пересадки из одной емкости в другую или для проведения инъекционных работ, а также искусственного получения половых продуктов; для длительного снижения активности рыб (на несколько часов) при их перевозке.

При действии малых доз анестетика рыбы через несколько минут сначала становятся малоподвижными, далее ложатся на дно или всплывают, продолжая дыхательные движения жабрами. При передозировке у рыб прекращаются движения жаберных крышек, и они могут погибнуть. Обычно при одной и той же концентрации анестетика при более высокой температуре его действие более эффективно, чем при более низкой. Прекращение наркоза осуществляется пересадкой рыб в свежую воду. При этом температура ее должна быть на 1—5°С ниже той, которая была при наркозе. Рыбы с разной видовой активностью и разных размеров требуют различных концентраций анестетика.

Растворы анестетиков обычно хранят не более трех дней. Для кратковременной наркотизации используют следующие анестетики в соответствующих концентрациях: амилен-гидрат (7—13 г/л), гидрохлорид-2-метил-4-винилоксихинолин (10— 20 мл/л), комбелен (0,1—0,2 мл/л), метилпентанол (0,5— 1 мл/л), метилпаратимол (2—4 мл/л), бикарбонат натрия (0,4—0,6 г/л), пропоксат (3—4 мл/л), пропоксимол (0,05— 0,4 мл/л), третичный амиловый спирт (0,25—0,5 мл/л), третичный бутиловый спирт (0,3—3,5 мл/л), трибромэтанол (5—50 мл/л), трикаин-метансульфонат (MS-222) (0,13— 0,26 г/л), трихлорбутанол (0,25—0,4 г/л), СО2 (0,2—0,4 г/л), хинальдин (5—12 мг/л), хинальдин-гидрохлорид (25 мг/л), хлоралгидрат (20—30 г/л), хлорэтон (0,2—0,4 г/л), эвгенол (100 мг/л), серный эфир (17,2 мг/л), уретан (0,5— 1 мг/л).

Для приготовления раствора хильнальдина 0, 1 мл его маслянистой жидкости растворяют в 1—2 мл этилового спирта или ацетона, после чего смесь выливают в емкость с 4,5—6 л воды.

Продолжительность нахождения рыбы в растворе хинальдина не должна превышать 10 мин.

При перевозке рыбы на небольшие расстояния в качестве анестетика используют: для морских рыб — амобарбитал в концентрации 105—130 мг/л, для пресноводных рыб— амиленгидрат (0, 5—1, 25 мл/л), хлоралгидрат (2,3—3,1 г/л) или трикаин-метансульфонат (MS-222) (10—25 мг/л). Реакцию воды стабилизируют бикарбонатом натрия (150 мг/л). Плотность посадки рыбы при наркотизации можно увеличить в 2—3 раза относительно нормы.

Хорошие результаты при перевозке рыб в течение 6—8 ч дает использование смеси анестетиков: менокаина и хинальдина по 10 мг/л. Эта смесь обладает малой размерной и видовой специфичностью действия и может использоваться для перевозки как пресноводных, так и морских рыб.

Добавлено (04 Окт 2014, 07:50)
---------------------------------------------
http://russian.alibaba.com/promoti....st.html

Добавлено (04 Окт 2014, 08:33)
---------------------------------------------
PS